Większość enzymów ma również swoje optymalne pH działania. Optimum pH, w jednym rzędzie optimum temperaturowego, to pozostały pierwszy wielkość stała środowiska charakteryzujący działanie enzymów. Wpływ pH na działanie enzymów wiąże się z faktem, że enzymy jak białka posiadają wiele aminokwasów ulegających jonizacji, zaś aminokwasy ognisko aktywnego w wielu przypadkach mogą sprawować swoją rolę zaledwie do wnętrza określonym stanie jonizacji. Jonizacja samych substratów dodatkowo kompleksów ES też ma własny wkład wewnątrz aktywności. Również oddziaływania enzym-substrat mogą dysponować styl jonowy, zależny od momentu jonizacji. Od stopnia jonizacji pewnych grup zależy też ogólna konformacja cząsteczki enzymu, zapewniająca mu pełną aktywność, oraz do wnętrza zbyt kwaśnym lub za zasadowym środowisku ferment ulegnie denaturacji.
Wykres układy aktywności enzymu od czasu pH ma w większości wypadków szkic dzwonowaty, oznacza to ferment ma największą działalność wewnątrz swoim optymalnym pH również działalność ta spada pospołu z oddalaniem się od czasu tego punktu (np. trypsyna). Niektóre jednakże enzymy mają właściwie stała działalność wewnątrz szerokim zakresie pH (np. papaina) oznacza to są wrażliwe ostatnim tchem na niskie pH, zachowując funkcjonowanie do wnętrza wysokim (jak esteraza cholinowa) to znaczy na odwrót. Zależność aktywności od czasu pH bada się w środku stałej temperaturze wobec maksymalnym wysyceniu enzymu substratem[60].